Hem de rentar el kit de vuit tubs de PCR després del seu ús. Hi ha algunes maneres de netejar el kit octal de PCR. A què he de prestar atenció a l'hora d'utilitzar-lo?
Principi del mètode experimental: La membrana de gel de sílice s'uneix a l'ADN en condicions d'alta sal, i se separa de l'ADN en condicions de baixa sal. Imprimacions, mononucleòtids, enzims, oli mineral, ions salins, etc. es separen en la solució de rentat que conté ADN, ja que no tenen propietats similars a l'ADN.
Materials experimentals: productes DE PCR, reactius, kits, kits de neteja PCR, instruments, consumibles, plaques de preparació d'ADN de 96 pous, plaques de pou profund de 96 pous, plaques en forma de V de 96 pous
1. El fabricant de vuit tubs de PCR parla sobre la composició, emmagatzematge i estabilitat del kit
1. Instruccions, consumibles: placa de preparació d'ADN de 96 pous, placa de 96 pous 1.6ml de pou profund, placa en forma de V de 96 pous.
2. PCR-A de memòria intermèdia: solució d'unió a l'ADN. Botiga ben tancada a temperatura ambient. Si es produeix precipitació, s'ha de dissoldre en un bany calent a 65 °C i refredar-se a temperatura ambient abans del seu ús.
3. Concentrat buffer W2: traieu la solució de sal. Abans d'utilitzar, afegiu etanol al volum especificat a l'ampolla, barregeu-ho bé i emmagatzemeu-lo a temperatura ambient. Es pot utilitzar 100% etanol o 95% d'etanol absolut.
4. Eluent: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8.5, emmagatzemat en estat segellat a temperatura ambient.
2. El fabricant de tubs de vuit acobladors de PCR parla dels passos d'operació
Els usuaris poden triar pressió negativa o centrifugació.
A. Mètode de pressió negativa
1. Connecteu correctament el dispositiu de pressió negativa, col·loqueu la placa de preparació d'ADN de 96 pous al dispositiu de pressió negativa; afegir 3 vegades pcr-A tampó a la PCR, digestió enzimàtica, etiquetatge enzimàtic o solució de reacció de seqüenciació (si la PCR-A tampó és inferior a 100 μl, afegir 100 μl); barrejar bé i transferir a una placa de preparació d'ADN de 96 pous, encendre i ajustar la pressió negativa a -25-30 polzades Hg, i aspirar lentament la solució a la placa.
2. Afegir 0.3 ml de memòria intermèdia W2 i absorbir la solució. Rentar dues vegades amb 0.3 ml de tampó W2 de la mateixa manera.
Confirmeu l'addició d'etanol absolut al volum indicat de Buffer W2 concentra't en l'ampolla de reactiu.
3. Mantenir la pressió negativa i extreure la placa de preparació d'ADN de 96 pous durant 10 minuts.
4. Moldre la placa de preparació de l'ADN de 96 pous 6 vegades sobre el teixit fibrós llarg amb el tub de drenatge mirant cap avall.
5. Col·loqueu la placa de preparació d'ADN de 96 pous en una placa en forma de V de 96 pous, afegiu 25-30ul d'aigua o elut al centre de la membrana i deixeu-ho reposar durant 1 minut a temperatura ambient. L'ADN va ser eludit per centrifugació a 3.000 x g durant 5 min.
B. Centrífug
1. Afegiu 3 volums de PCR-A de buffer (si la PCR-A de memòria intermèdia és inferior a 100 μl, afegiu 100 μl) a la PCR, la digestió, l'etiquetatge enzimàtic o les reaccions de seqüenciació; Barrejar i transferir a l'ADN de 96 pous en una placa de preparació de 96 pous. Col·loqueu la placa de preparació de l'ADN en una placa de pou profund de 96 pous de 96 ml, centrifugeu a 1000 x g durant 1 min i descarteu el filtrat.
2. En una placa de preparació d'ADN de 96 pous, afegiu 0,3 ml de tampó W2, centrifugar a 1000×g durant 1 minut i descartar el filtrat. Rentar de nou de la mateixa manera amb 0.3 ml de tampó W2. Confirmeu l'addició d'etanol absolut al volum indicat de Buffer W2 concentra't en l'ampolla de reactiu.
3. Col·loqueu la placa de preparació d'ADN de 96 pous en una placa de pou profund de 96 1,6 ml i centrífuga a 3.000×g durant 10 minuts.
4. Col·loqueu la placa de preparació d'ADN de 96 pous en una placa inferior neta en forma de V de 96 pous, afegiu 25-30ul d'aigua o elut al centre de la membrana i deixeu-ho reposar durant 1 minut a temperatura ambient. L'ADN va ser eludit per centrifugació a 3.000 x g durant 5 min.
Els fabricants de tubs octals DE PCR parlen de qüestions que necessiten atenció:
1. Escalfar l'eluent o l'aigua a 65 ° C pot ajudar a millorar l'eficiència d'elució.
2. Les molècules d'ADN són àcides, es recomana emmagatzemar en 2,5 mM Tris-HCl, eluat pH 8.5.
