Sovint hi ha problemes d'un tipus o un altre en el procés de cultiu cel·lular. No subestimeu el cultiu cel·lular, però conté preguntes universitàries. En comunicar-se amb els usuaris, trobareu molts problemes que es poden evitar. Els següents són habituals en el procés de cultiu cel·lular. Analitzar la causa de l'anormalitat.
placa de Petri
1. Les cèl·lules cultivades no s'adhereixen a la paret
possible motiu
1. Digestió excessiva de tripsina;
2. Contaminació per micoplasmes;
3. El valor del pH del medi és massa alcalí (descomposició de NaHCO3);
4. Envelliment cel·lular;
5. La concentració inicial de cèl·lules inoculades és massa baixa o massa alta.
Solució
1. Escurçar el temps de digestió de la tripsina o reduir la concentració de tripsina;
2. Aïllar el cultiu i detectar micoplasmes. Netegeu el suport o la incubadora. Si es troba contaminació per micoplasma, descartar el cultiu;
3. Utilitzeu una solució d'àcid acètic estèril per ajustar el pH o ompliu amb CO2 estèril;
4. Habilitar noves cèl·lules de conservació;
5. Ajustar la concentració òptima de cèl·lules inoculades.
2. Agrupament de cèl·lules en suspensió
possible motiu
1. El medi de cultiu conté ions calci i magnesi;
2. Contaminació per micoplasmes;
3. La sobredigestió per proteasa provoca lisi cel·lular;
4. Contaminació de l'ADN.
Solució
1. Rentar les cèl·lules amb una solució de sal equilibrada sense calci i magnesi, i bufar i xuclar suaument
2. Les cèl·lules obtenen una sola suspensió cel·lular;
3. Separar el cultiu i detectar el micoplasma;
4. Tractament de cèl·lules amb DNasel.
3. Les cèl·lules cultivades creixen lentament
possible motiu
1. A causa de la substitució de diferents medis de cultiu o sèrum;
2. Alguns components necessaris per al creixement cel·lular en el medi de cultiu, com la glutamina o els factors de creixement, estan esgotats o mancats o han estat destruïts;
3. Hi ha una petita quantitat de contaminació bacteriana o fúngica al cultiu;
4. Emmagatzematge inadequat dels reactius;
5. La concentració inicial de cèl·lules inoculades és massa baixa;
6. Les cèl·lules han envellit;
7. Contaminació per micoplasmes.
Solució
1. Compareu la composició del nou medi i el medi original, compareu el nou sèrum i el sèrum antic per donar suport als experiments de creixement cel·lular i deixeu que les cèl·lules s'adaptin gradualment al nou medi;
2. Canviar-se al medi de cultiu acabat de preparar, o afegir glutamina i factors de creixement;
3. Utilitzeu un medi de cultiu sense antibiòtics per al cultiu, si es troba contaminat, descarteu el cultiu;
4. El sèrum s'ha d'emmagatzemar entre -10 i -20 graus. El medi de cultiu s'ha d'emmagatzemar a 2-8 graus a la foscor. El medi de cultiu complet que conté sèrum s'ha d'emmagatzemar a 2-8 graus i s'ha d'utilitzar en 1 setmana;
5. Augmentar la concentració inicial de cèl·lules inoculades;
6. Canviar a una nova cel·la de conservació;
7. Aïllar el cultiu i detectar micoplasmes. Netegeu el suport i la incubadora. Si es troba contaminació per micoplasma, descartar el cultiu.
En quart lloc, les cèl·lules cultivades creixen malament
possible motiu
A. L'estat de la cèl·lula en si
1. El nombre de passatges cel·lulars és gran, i les cèl·lules estan envellint;
2. Quantitat d'inoculació cel·lular: quantitat d'inoculació massa baixa, creixement cel·lular lent;
3. El pas de les cèl·lules és massa tard: intoxicació cel·lular, que afecta el creixement de les cèl·lules després del pas;
4. El temps de digestió de la tripsina és massa llarg o massa curt: si el temps és massa llarg, les cèl·lules moren; si el temps és massa curt, les cèl·lules no es separen completament en grups, i les cèl·lules moren;
5. Criopreservació i recuperació de cèl·lules: congelació lenta i lisi instantània.
B. Contaminació
1. Contaminació per micoplasmes;
2. Contaminació de motlles.
C, medi de cultiu o sèrum
1. Sense validació abans de la substitució del sèrum o del mitjà;
2. Si el mitjà seleccionat és adequat;
3. Si la preparació del mitjà és adequada;
4. Si la preparació del mitjà és precisa.
D. conrear el medi ambient
1. El subministrament de CO2 és normal?
2. La temperatura de la incubadora o agitador està correctament controlada.
Solució
D'acord amb els quatre possibles motius anteriors, feu solucions específiques
1. Fixeu-vos en l'estat de les cèl·lules: com ara el nombre de passatges, la quantitat d'inoculació, etc.;
2. Evitar la contaminació (utilitza sèrum regular, legal i traçable);
3. Utilitzar sèrum o medi adequat, preferiblement verificat;
4. Presta atenció a l'entorn del laboratori.
Possibles causes de mort cel·lular en cultiu
1. No hi ha CO2 a la incubadora;
2. La temperatura a la incubadora fluctua massa;
3. Les cèl·lules es fan malbé durant la criopreservació o la recuperació;
4. La pressió osmòtica del medi de cultiu és incorrecta;
5. Acumulació de metabòlits tòxics en el medi de cultiu.
Solució
1. Detectar CO2 a la incubadora;
2. Comproveu la temperatura a la incubadora;
3. Prendre una nova espècie cel·lular conservada;
4. Detectar la pressió osmòtica del medi de cultiu;
5. Canvi a medi de cultiu fresc;
