Per a les plaques de Petri de fons de vidre habituals al mercat, normalment es fa un forat a la part inferior d'una placa de Petri de plàstic i, a continuació, s'enganxa una coberta de vidre o portacells amb un gruix de 170-220 μm a la part inferior de la placa. placa de Petri amb cola sense ombres o gel de sílice. No tot el fons de la placa de Petri és de vidre. L'àrea apta per a l'observació és només a la zona de la perforació. Tanmateix, a causa de la hidrofobicitat del vidre, quan es cultiven cèl·lules, les cèl·lules no s'adhereixen bé al vidre i l'estat de creixement no és bo, i fins i tot el fenomen de la delaminació cel·lular es produeix durant la imatge d'exploració confocal.
Per tal que les cèl·lules s'adhereixin bé, cal confirmar que s'han recobert reactius proteics específics abans d'utilitzar plats de fons de vidre per al cultiu cel·lular.
edredó de fer-ho tu mateix
Els diferents cultius cel·lulars requereixen diferents reactius de recobriment. Al mateix temps, com que la proteïna utilitzada per al recobriment és un producte biològic, la puresa del producte i la dosi de la proteïna de recobriment de diferents empreses són diferents. Aquesta publicació tècnica només és com a referència. La dosi específica dels reactius de recobriment ha de fer referència a les instruccions de les marques utilitzades. . I el millor és fer un experiment de gradient amb els reactius que utilitzeu per trobar la concentració de recobriment més adequada.
Aquí hi ha un exemple de poli-L-lisina (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
El recobriment de PLL és adequat per a la gran majoria de cèl·lules, especialment per al cultiu de neurones al sistema central. Cal fer que el contingut de proteïnes (ug/cm2) per unitat de superfície assoleixi la quantitat desitjada durant l'ús. La quantitat recomanada de recobriment per a PLL en aquest exemple és de 2 ug/cm2. Cal calcular la quantitat de proteïna necessària segons l'àrea de recobriment i el volum de recobriment.
Per exemple: placa de Petri amb fons de vidre de 35 mm, l'àrea de creixement cel·lular és de 3,5 cm2, l'àrea de recobriment és de 4,1 cm2 i el volum de la solució de recobriment és de 400 ul, aleshores la dosi recomanada és de 2 ug/cm2. Aleshores es necessiten 8,2 ug de PLL en un sol pou. Si només s'afegeixen 400 ul de solució de PLL, la concentració de la solució de PLL és de 20,5 µg/ml (uns 20 µg/ml). Per tant, la solució de reserva s'ha de diluir amb aigua ultrapura.
Passos específics:
1. Diluir la solució d'estoc de PLL 1:5 amb aigua ultrapura.
2. Afegiu 400 ul de dilució de PLL a cada placa de Petri de fons de vidre de 35 mm.
3. Incubeu durant 1-2 hores a temperatura ambient i aspireu la dilució de PLL.
4. Rentar amb cura 3 vegades amb 2 ml de solució de PBS o medi sense sèrum i aspirar la solució de rentat.
5. Afegiu directament la suspensió cel·lular per al cultiu.
Avaluació del mètode
A causa de les diferents propietats de diverses proteïnes de recobriment, les diferents proteïnes de recobriment s'utilitzen de diferents maneres. Sovint es crea nova contaminació a causa de la necessitat de revestir els plats amb fons de vidre. A més, sovint es descobreix la contaminació després de l'aixecament de les cèl·lules, cosa que no només retarda el temps, sinó que també malbarata els consumibles del kit. Després de tot, els reactius proteics recoberts i els plats amb fons de vidre de qualitat assegurada són cars (els plats amb fons de vidre de mala qualitat poden filtrar perquè la cola no és enganxosa o la cola utilitzada és tòxica per a les cèl·lules).
Plaques de Petri confocals sense recobriment
Per als nens que volen estalviar temps i esforç, és més convenient utilitzar plats de cultiu confocal sense recobriment.
Els factors a tenir en compte a l'hora d'escollir un plat de cultiu adequat són: si és adequat per a les vostres pròpies cèl·lules, si les característiques òptiques del plat de cultiu compleixen els requisits confocals.
Les plaques de Petri que compleixen els requisits dels factors anteriors no es limiten a les plaques amb fons de vidre recoberts. De fet, tothom sap que els plats de plàstic són més barats i més fàcils d'adherir a les cèl·lules que el vidre. Aquí teniu un exemple d'un plat de cultiu confocal de Shanghai Jingan, per parlar dels paràmetres que ha de tenir un plat de cultiu adequat per a experiments confocals:
Es pot veure que els paràmetres físics dels plats de cultiu confocal que compleixen els requisits d'ús directe són molt propers al vidre, però al mateix temps, també tenen propietats hidròfiles, que poden fer que la majoria de les cèl·lules s'adhereixin millor; i la ductilitat són millors que el vidre. Permet que la majoria de línies cel·lulars i cèl·lules primàries s'adhereixin directament a la paret i no és fràgil, la qual cosa és una bona opció.
També podeu trobar el plat de cultiu confocal més adequat per al vostre experiment segons els vostres requisits experimentals específics i els paràmetres de la taula anterior.
Avaluació del mètode
Escollir aquest tipus de plaques de Petri no requereix un recobriment addicional, reduint molt el risc de contaminació. I com que el fons de plàstic és més fàcil de treballar, no cal cola per fixar-lo al fons de la placa de Petri. Eliminar la possibilitat de fuites o citotoxicitat.