Com tots sabem, els tipus de cèl·lules cultivades al laboratori es poden dividir aproximadament en dos tipus: cèl·lules adherents i cèl·lules en suspensió, i només existeixen alguns tipus de cèl·lules en ambdós estats.
Les cèl·lules en suspensió es refereixen a un tipus de cèl·lules que poden créixer en estat suspès en un medi sense dependre de suports, com els limfòcits i la majoria de cèl·lules derivades del sistema sanguini. (com les cèl·lules de leucèmia del ratolí WEHI-3, les cèl·lules de leucèmia humana K-562, HL-60). A la indústria, cada cop s'han domesticat i cultivat més cèl·lules adherents en plena suspensió. Actualment, les cèl·lules SP2/0, NS0, CHO, BHK i HEK293 s'utilitzen principalment a la indústria, i s'utilitzen principalment per a la producció de proteïnes recombinants; les cèl·lules de pas que s'utilitzen habitualment en productes biològics veterinaris inclouen principalment cèl·lules BHK21 cultivades en suspensió completa, cèl·lules MDCK; i les cèl·lules Vero, les cèl·lules PK, les ST, les cèl·lules Marc145, etc. amb l'ajuda del cultiu de suspensió de microportadors, cada cèl·lula té característiques diferents.
Cèl·lules de suspensió
Cel·les de suspensió "thp-1" 200x
En general, les cèl·lules en suspensió són més fàcils de manejar que les cèl·lules adherides perquè no es requereix tripsinització per al pas de les cèl·lules en suspensió. Però això no vol dir que les cèl·lules en suspensió siguin més fàcils de créixer que les cèl·lules adherides. Per als novells, és més difícil. Sempre hi ha diversos problemes: per exemple, per què apareixen sempre les cèl·lules mortes i la diferenciació cel·lular; s'acorda que el pas és fàcil, però el resultat serà la diferenciació; Els problemes tornen a aparèixer després de la criopreservació i la recuperació!
A continuació, discutim alguns punts clau sobre el cultiu de cèl·lules en suspensió ~
Punt 1: Prou paciència, és molt necessari
Moltes cèl·lules en suspensió tenen una viabilitat relativament pobra quan acaben de recuperar-se de la criopreservació. En aquest moment, hem de tenir prou paciència per esperar que les cèl·lules finalitzin la seva autoreparació i entrin en la fase de creixement logarítmic. Per exemple, la THP-1 (leucèmia monocítica humana) sovint necessita 7-10 dies de període de recuperació des de la descongelació fins a la proliferació normal; Jurkat, el clon E6-1 (cèl·lules de leucèmia limfocítica T humana) també necessita 5-7 dies després de la recuperació. Tornar a l'estat abans de congelar-se. Els novells poden renunciar a l'entrenament durant aquest període, així que si us plau, tingueu més paciència! Cultivar aquestes cèl·lules també és un procés de conrear la paciència!
Punt 2: Agafeu la densitat d'inoculació
En termes generals, la densitat de les cèl·lules en suspensió no hauria de ser inferior a 500,000/ML. Moltes cèl·lules de suspensió depenen de la densitat, i la no proliferació causada per la baixa densitat també és un dels problemes habituals dels novells. Per descomptat, hi ha molt poques cèl·lules l'estat de les quals empitjora quan la densitat és alta, com ara W6/32 (cèl·lules d'hibridoma de cèl·lules B de ratolí). Per tant, és molt important buscar informació rellevant per comprendre les característiques de les cèl·lules abans de cultivar cèl·lules desconegudes. Només coneixent-se a tu mateix i a l'enemic podràs guanyar totes les batalles!
La freqüència de substitució del mitjà no s'ha de limitar a "clarament". Les cèl·lules són éssers vius. Durant un cicle de cultiu continu, es poden afegir nutrients específics com el medi suplementari i la glucosa diverses vegades en funció de l'estat de creixement de les cèl·lules per mantenir un bon estat de creixement de les cèl·lules. . Durant el procés de cultiu en suspensió, amb la proliferació de cèl·lules, el consum de nutrients en el medi original i l'augment dels metabòlits, la viabilitat de les cèl·lules disminuirà, i el suplement oportú de nutrients farà que les cèl·lules estiguin en un ambient de vida relativament bo. No entraré en detalls aquí i evitaré la centrifugació freqüent i la substitució de líquids.
Parlem del mètode de substitució de líquids:
①Mètode d'intercanvi de líquid complet centrífug
És a dir, traieu tot el medi antic mitjançant la centrifugació (800-1000rpm, 5 min) i substituïu-lo per mitjà nou. Aquest mètode és adequat per a la substitució mitjana de cèl·lules de suspensió "sòlides de pell" ben elevades (com ara K562), o la situació actual en què les cèl·lules estan en bon estat i la densitat és alta, donant lloc a un gran consum de medi. L'avantatge d'aquest mètode és que el medi es canvia a fons i es poden eliminar algunes restes cel·lulars, però també provocarà un cert grau de dany mecànic a les cèl·lules.
② Mètode d'intercanvi de mitja centrífuga
És a dir, centrifugant (800-1000rpm, 5 min) una suspensió cel·lular al 50%, substituïu el 50% del volum de medi fresc. Aquest mètode és adequat per comparar cèl·lules "hipòcrites" difícils de cultivar (com ara thp-1) o la situació en què la densitat és baixa però cal eliminar més residus en l'estat d'ajust.
③ Mètode d'intercanvi de líquids de sedimentació
És a dir, en comptes d'utilitzar una centrífuga, s'utilitza el mètode de sedimentació natural per gravetat per separar el medi de les cèl·lules, de manera que substitueixi tot o part del medi fresc. Tanmateix, té limitacions d'aplicació: només és adequat per a cèl·lules que poden formar cúmuls de cèl·lules d'una mida determinada (en cas contrari, no es poden assentar de manera natural i només es poden centrifugar a baixa velocitat), especialment quan es tracta de cèl·lules que depenen de l'agregació cel·lular per proliferar. , com ara NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Aquest mètode pot minimitzar el dany mecànic causat pel procés de centrifugació durant el procés d'intercanvi de líquids, alhora que reté la massa cel·lular agregada i l'eliminació de les restes cel·lulars és relativament exhaustiva.
Després de dominar els punts anteriors, a més d'una bona llavor cel·lular, és a la volta de la cantonada per fer créixer cèl·lules de suspensió "belles"!
placa de cultiu cel·lular
La placa de cultiu cel·lular en forma d'U de Yongyue Medical s'utilitza principalment per al cultiu de cèl·lules en suspensió, utilitzant poliestirè de grau mèdic (PS), produït en un taller de purificació de 000-nivell 100, esterilitzat per irradiació, lliure de DNasa, RNasa i pirogen -gratuït, seguretat i protecció del medi ambient.
Les plaques de cultiu cel·lular estan disponibles en diverses especificacions per satisfer les necessitats de diversos cultius bacterians. Els tipus de producte es divideixen en 6-bé, 12-bé, 24-bé, 48-bé, 96-bé i 384-bé, de quin 96-ben es divideix en fons pla, fons en U, fons en V; Les plaques de cultiu en forma d'U s'utilitzen principalment per al cultiu de cèl·lules en suspensió; Les plaques de cultiu en forma de V s'utilitzen principalment per a experiments d'hemaglutinació immunològica.