Com diu la dita, si un treballador vol fer una bona feina, primer ha d'esmolar les seves eines. L'elecció dels consumibles és molt important per obtenir resultats satisfactoris de l'experiment de PCR. Quan analitzem els resultats de la PCR, sovint ens centrem en l'anàlisi dels primers, la concentració d'enzims, la temperatura i el temps, però ignorem que els consumibles de PCR també són un dels factors que influeixen. Hi ha molts tipus de consumibles de PCR, com triar els consumibles de PCR adequats? Aquí teniu algunes preguntes per ajudar-vos a trobar la vostra resposta.
consumibles pcr
1. Per què els consumibles de PCR són generalment fets de PP?
Tant si es tracta de PCR ordinària com de PCR quantitativa de fluorescència en temps real (qPCR), normalment els seus consumibles estaran en contacte directe amb reactius o mostres, de manera que es requereixen materials d'alta qualitat i bones tècniques de processament en el procés de producció i preparació. Els consumibles generals estan fets de polipropilè (PP). El polipropilè (PP) és un material biològicament inert, la superfície no és fàcil d'adherir a les biomolècules i té una bona resistència química i tolerància a la temperatura.
2. Com triar tubs/plaques de PCR amb diferents volums?
Volums comuns per a tubs/plaques de PCR:
• Tub únic/{{0}}tub/12-tub: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}placa de pous: 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}placa de pous: 0,02 ml
Especificacions per a tubs/plaques de PCR:
Seleccioneu el producte adequat segons els requisits experimentals específics. El volum de la majoria dels tubs de PCR pot complir els requisits de les reaccions de PCR. Les especificacions de capacitat estan disponibles en capacitat estàndard i capacitat baixa. En general, es recomana triar primer tubs de baixa capacitat. Com que els tubs/plaques del reactor de baix volum tenen menys marge, es millora la transferència de calor i es redueix l'evaporació. Al mateix temps, cal evitar afegir massa o massa poca mostra en afegir mostres. Massa pot provocar una disminució de la conductivitat tèrmica, vessament i contaminació creuada, mentre que massa poca pot provocar pèrdua per evaporació de la mostra.
3. Quina diferència hi ha entre la coberta plana/coberta convexa del tub únic o del tub 8-fila?
Quan el volum de mostra és petit, es prefereixen tubs únics o tubs {{0}}tubs. Tanmateix, quan el requisit de volum de reacció és gran, prevalen els tubs individuals i el volum pot arribar als 0,5 ml. Hi ha dos tipus de tub únic i tub de 8-tub amb coberta plana i coberta convexa, cadascun té els seus avantatges. La tapa plana proporciona un lliurament precís de senyal fluorescent per a qPCR; fàcil d'escriure en retoladors. La coberta convexa està en contacte amb la coberta de l'instrument PCR per reduir la deformació del tub causada per la pressió; tanmateix, afectarà la transmissió de senyals fluorescents i no es pot aplicar als experiments de qPCR.
4. Quines diferències hi ha en els escenaris d'ús de diferents 96-plaques de pou?
96-Les plaques de pou es divideixen generalment en plaques sense faldilla, plaques amb faldilla i plaques amb faldilla completa.
Plaques sense faldilla: compatibles amb la majoria de termocicladors o màquines qPCR, però no aptes per a aplicacions automatitzades. L'estabilitat no és alta durant el procés de pipeteig i s'ha d'utilitzar amb un suport de placa.
Placa semifalda: es pot adaptar per etiquetar o aplicar codi de barres, i aplicació automàtica, i té una bona estabilitat de pipeteig.
Placa de faldilla completa: molt adequada per a aplicacions de laboratori automatitzat, però també apta per a aplicacions d'etiquetes i codis de barres. Bona resistència mecànica, adequada per a màquines de PCR amb mòduls que sobresurten i alta estabilitat durant el pipeteig.
5. El material de la placa/tub de PCR és més gruixut i més estable?
no. Els consumibles de PCR han de tenir un gruix de paret uniforme per proporcionar una transferència de calor consistent. La paret del tub ultrafina és un 50 per cent més prima que la versió estàndard, cosa que pot reduir encara més la barrera tèrmica, donant lloc a una resposta més ràpida i millor.
6. Per a les plaques 96-pou o 384-pou, per què les cantonades i les etiquetes tallades no són iguals?
Tall de cantonada: l'elecció de la posició de tall de cantonada de la placa PCR depèn dels requisits de l'instrument adaptat per facilitar el posicionament.
Identificació: les marques alfanumèriques a les plaques de PCR ajuden a identificar els pous individuals i les ubicacions de les mostres. En general, es tracta d'un logotip de nombre de color aixecat o d'un logotip gravat. Per a alguns experiments d'aplicació automatitzada, la placa de reacció amb marques impreses estarà millor segellada.
7. Alguns pous de plaques de PCR sobresurten, mentre que altres són plans. Quin és millor?
El que és adequat és bo. Les plaques de PCR comunes tenen dos tipus: vores de pou plans i vores de pou elevat. Placa de reacció amb vora plana, adequada per a la majoria de termocicladors. La placa de reacció a la vora del forat elevador és convenient per segellar, cosa que pot reduir el risc de contaminació creuada entre mostres.
8. Com triar tubs/plaques de PCR de diferents colors?
Per a les reaccions de PCR ordinàries, es poden utilitzar les transparents. En la reacció de PCR en temps real, la sensibilitat i la consistència del tub blanc són relativament més altes. Les parets del tub blanc impedeixen que la fluorescència passi a través de les parets del tub i la refracció, evitant així que la fluorescència passi al mòdul de calefacció, sigui absorbida pel mòdul o reflecteixi de manera inconsistent. En comparació amb els tubs transparents, es poden recollir senyals de fluorescència més forts i enfocats a la part superior dels tubs blancs.
