El procés bàsic de detecció per PCR del nou coronavirus
1. Recollida de mostres: recollida simultània de mostres de les vies respiratòries superiors (incloent-hi la nasofaringe i l'orofaringe) i les vies respiratòries inferiors (incloent-hi l'esput, l'aspirat traqueal o el líquid de rentat broncoalveolar) per a la detecció de nCoV mitjançant RT-PCR. Quan hi ha mostres de les vies respiratòries inferiors disponibles: utilitzeu un EPI adequat per a la recollida de mostres (tingueu en compte les mostres d'URT per a les precaucions d'exposició i gotes i les mostres de LRT per a les precaucions per a l'aire). i medi de transport de virus. No prengui mostres de les fosses nasals o les amígdales. Per als pacients amb sospita de nCoV, especialment amb pneumònia o pacients greus, una sola mostra d'URT no pot descartar el diagnòstic, i es recomana augmentar les mostres d'URT i LRT.
2. Extracció d'àcids nucleics: instrument d'extracció d'àcids nucleics o extracció manual d'àcids nucleics
1), sense necessitat d'instruments, utilitzeu extracció manual
Equips i consumibles de laboratori necessaris per a l'extracció d'àcids nucleics i l'aïllament de mostres:
gabinets de seguretat biològica (funcions: separació de mostres, dotació de personal, mostres i protecció del medi ambient),
Centrífuga refrigerada d'alta velocitat d'escriptori (funció: velocitat superior o igual a 12000 RPM, anàlisi d'àcids nucleics, etc.),
Nevera a baixa temperatura (funció: emmagatzematge de reactius),
Bany metàl·lic, pipeta (funció: dosificació precisa),
Tubs de centrífuga esterilitzats (funció: separació d'àcids nucleics, etc.),
Guants de làtex (funció: anticontaminació),
Etanol absolut, isopropanol, aigua lliure de DNasa i RNasa (aigua no tractada amb DEPC).
3. Instrument d'extracció automàtica d'àcids nucleics: (extracció automàtica, es poden extreure 32 mostres una vegada en 26 minuts)
La placa preinstal·lada corresponent es carrega i s'extreu directament a la màquina:
4. Detecció quantitativa per PCR de fluorescència:
Equips i consumibles necessaris: armari de seguretat biològica (funció: preparació de mostres, dotació de personal, mostres i protecció del medi ambient),
Instrument PCR quantitatiu de fluorescència (funció: detecció i anàlisi d'amplificació de PCR),
Centrífuga refrigerada d'alta velocitat d'escriptori (funció: velocitat superior o igual a 12000 RPM),
Congelador de baixa temperatura (emmagatzematge de mostres a -86 graus, emmagatzematge de reactius a -20 graus i 4 graus),
oscil·lador, (mescla)
Puntes de pipeta graduades (Funció: càrrega precisa), mida 1-10ul
Tubs de centrífuga esterilitzats (0,5/1,5/2 ml),
0Tub/placa de PCR de grau òptic de 0,2 ml (funció: tub de reacció de PCR),
Guants de làtex (funció: anticontaminació).
L'extracció d'àcids nucleics, la configuració del sistema de reacció i la interpretació dels resultats estan subjectes a les instruccions del kit.
